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De acuerdo a informaciones de la época, la asamblea estuvo presidida por el obispo de la diócesis del Río de la Plata, con sede en Asunción, el franciscano Martín Ignacio de Loyola (sobrino de San Ignacio de Loyola) y el gobernador y Capitán General de la Provincia, Hernando Arias de Saavedra.
La apertura del sínodo estuvo presidida por una procesión que partió de la iglesia de la Compañía de Jesús (entonces Catedral, ya que ésta se encontraba en construcción), hasta la iglesia conventual de San Francisco de Asís, ubicada en Barrancas del Río entre Caballero y México.
Con la presencia de Hernandarias, las órdenes religiosas, el clero secular, Cabildo, autoridades y pobladores de Asunción, el obispo Loyola celebró una misa solemne de la festividad de San Francisco de Asís. Luego de la lectura del edicto de convocatoria del sínodo, la procesión retornó desde la iglesia de San Francisco a la de la Compañía de Jesús.
Asistieron a este sínodo, además del obispo y el gobernador, los superiores de los mercedarios, franciscanos y jesuitas; los curas de la Catedral, la Encarnación, San Blas Yaguarón; también el misionero Fray Luis de Bolaños, Roque González de Santa Cruz y los procuradores de las ciudades de Asunción, Buenos Aires Aires, Santa Fe, Corrientes, Concepción del Bermejo, Villarrica del Espíritu Santo, Ciudad Real y Santiago de Jerez, además de integrantes de la Provincia Gigante de las Indias.
De la Asamblea Sinodal surgieron los primeros textos sociales de la iglesia del Paraguay y la aprobación del Catecismo Guaraní de Bolaños, como el único y obligatorio para todo el Río de la Plata.
Cabe recordar que Fray Luis de Bolaños fue el creador de la grafía guaraní al componer el primer vocabulario y gramática de dicha lengua. Con ayuda de los novicios guaireños Fray Gabriel de Guzmán, nieto de Irala, y Fray Juan Bernardo, Bolaños tradujo al guaraní rezos y doctrina católica, convirtiéndose su obra, al decir del padre Meliá, en la Carta Magna del guaraní paraguayo. Por esta razón, este año se conmemora también el IV Centenario de la Reducción a Escritura de la Lengua Guaraní.