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La estrategia empleada es aplicar una metodología basada en una prueba tamiz con alta sensibilidad, donde los sueros positivos son analizados por pruebas complementarias que definen el estatus del animal. En nuestro país, se emplea la prueba de Rosa de Bengala (RB) como tamiz, la seroaglutinación lenta en tubos (SAT-Método Wright) y 2-Mercaptoetanol (2-ME) como confirmatorias.Esta metodología, bien implementada, ha contribuido por muchos años para el control y erradicación de la enfermedad, sin embargo, la misma presenta algunas dificultades que merecen ser mencionadas. Todas estas técnicas tienen el inconveniente de ser subjetivas y, por ende, depender de la capacidad de resolución del ojo del operador. Además, las mismas no tienen la capacidad de diferenciar los animales vacunados con Cepa 19 de Brucella Abortus de aquellos infectados por cepas de campo.
En los últimos años, se han desarrollado nuevas técnicas con el objetivo de incrementar la calidad del diagnóstico y eliminar la subjetividad de las mismas.
La aparición de los enzimo-inmunoensayos (ELISA) contribuyó en gran medida a cumplir con dichos objetivos recientes; sin embargo, una nueva técnica fue desarrollada: la polarización fluorescente (FPA), que no solo comparte las características de los ELISA, sino que además es más simple y rápida.
De este modo, se estima que la aplicación de estas nuevas técnicas podrían contribuir en gran medida a los planes de control y erradicación de la brucelosis bovina.
Los sueros utilizados fueron muestras que ingresaron al laboratorio para control de rutina de brucelosis, siendo seleccionadas todas las que arrojaron resultado POSITIVO a la prueba Rosa de Bengala y luego sometidas a las pruebas de SAT 2-ME y FPA.
Se procesó un total de 1.657 muestras de suero bovino, procedentes de diversos establecimientos del país; entre las que se incluyeron muestras de animales adultos y vaquillas a partir de 15 meses de edad y terneras vacunadas con Cepa 19, 90 días posvacunación. Los resultados obtenidos demuestran la alta especificidad de la Técnica de FPA; ya que identifica con alta precisión los animales realmente enfermos, evitando condenar animales de dudosa positividad por las limitaciones propias de las otras técnicas de rutina.
INCORPORACIÓN DE FPA
La incorporación de este nuevo método al Programa Nacional de Control y Erradicación de la Brucelosis será un valioso aporte para lograr los objetivos propuestos por la institución oficial, ya que permitirá:
Detectar como positivos, animales que realmente padecen la enfermedad.
Evitará condenar falsos positivos al sacrificio.
Permitirá comercializar hembras con certificado antes de los 18 meses de edad.
Definirá correctamente reacciones positivas falsas debido a vacunaciones tardías o persistencia de títulos posvacunales inherentes a la sensibilidad aumentada de algunos animales a la Cepa 19.
Permitirá la certificación o recertificación de hatos o establecimientos libres, evitando inconvenientes creados por la aparición de sospechosos o falsos positivos.
VENTAJAS
La decisión de utilizar FPA en reemplazo del SAT y 2-ME como prueba de confirmación presenta otras ventajas:
Permite procesar muestras hemolizadas; rapidez del ensayo; simplicidad del ensayo; fácil interpretación del ensayo; validación internacional del mismo; no posee la toxicidad y el efecto cancerígeno del 2 mercapto etanol.
El costo del análisis es accesible. Muestreando un grupo de 100 animales, con un animal "ENFERMO" por SAT -2ME y "SANO" por FPA, el costo de no eliminar ese animal justifica gastos de laboratorio de dichos animales muestreados.
EJEMPLO
100 determinaciones de Rosa de Bengala C/U = G. 6.500 G. 650.000.
1 determinación de FPA C/U = G.19.500 G.19.500
100 extracciones de sangre C/U = G.1.000 G. 100.000
Total G. 769.500
Venta de hembra al mercado
Peso aproximado de 400 kg. a G. 6.000. KPV Total G. 2.400.000.
Esto es solo un ejemplo orientativo; no implica que el veterinario deba cobrar ese honorario de extracción de muestra, ni que G. 6.000 sea el precio exacto de venta, pero está dentro de los valores que maneja el mercado. Solo tenemos que considerar que por cada hembra sana (negativa) que descartamos como enferma nos alcanza para pagar:
Honorarios profesionales; análisis de laboratorio. Lo que realmente importa es que no estamos eliminando animales sanos; no perdemos beneficios económicos por establecimiento libre; desaparece la presión para obtener certificados sanitarios que no se corresponden con los resultados.
En esta enfermedad es de vital importancia el conocimiento epidemiológico de la misma por parte del veterinario asesor y del laboratorio que procesa las muestras.
El veterinario debe conocer los puntos críticos de la cadena epidemiológica para plantear una estrategia desde donde atacar para poder interrumpir el contagio de los animales en las fuentes de infección.
Es obligatorio e imperioso que los laboratorios de diagnóstico entiendan y conozcan la utilidad de cada ensayo (Rosa de Bengala, SAT, 2 ME, FPA, ELISA de competición, ELISA indirecto) a los efectos de indicar la prueba que corresponda de acuerdo a la situación epidemiológica planteada o la urgencia en la obtención de los resultados.
Consideramos que es importante avanzar en la implementación de ensayos de lectura en equipos, FPA, ELISA. Existen varios motivos, por ejemplo: Estandarización de las lecturas; utilización de controles positivos y negativos en forma continua; registro escrito de los ensayos; registro electrónico de los ensayos; reporte de datos epidemiológicos en forma rápida; disminución de la cantidad de puntos críticos; disminución de la cantidad de reactivos y soluciones.
CONCLUSIÓN
La utilización del método FPA como prueba confirmatoria para el diagnóstico de brucelosis es de gran importancia en un programa de control y erradicación de la enfermedad, como así también la posibilidad de usar como prueba de barrido, y de esa forma optimizar la detección de anticuerpos específicos para Brucella.
(*) Técnicos de CEDIVET.
En los últimos años, se han desarrollado nuevas técnicas con el objetivo de incrementar la calidad del diagnóstico y eliminar la subjetividad de las mismas.
La aparición de los enzimo-inmunoensayos (ELISA) contribuyó en gran medida a cumplir con dichos objetivos recientes; sin embargo, una nueva técnica fue desarrollada: la polarización fluorescente (FPA), que no solo comparte las características de los ELISA, sino que además es más simple y rápida.
De este modo, se estima que la aplicación de estas nuevas técnicas podrían contribuir en gran medida a los planes de control y erradicación de la brucelosis bovina.
Los sueros utilizados fueron muestras que ingresaron al laboratorio para control de rutina de brucelosis, siendo seleccionadas todas las que arrojaron resultado POSITIVO a la prueba Rosa de Bengala y luego sometidas a las pruebas de SAT 2-ME y FPA.
Se procesó un total de 1.657 muestras de suero bovino, procedentes de diversos establecimientos del país; entre las que se incluyeron muestras de animales adultos y vaquillas a partir de 15 meses de edad y terneras vacunadas con Cepa 19, 90 días posvacunación. Los resultados obtenidos demuestran la alta especificidad de la Técnica de FPA; ya que identifica con alta precisión los animales realmente enfermos, evitando condenar animales de dudosa positividad por las limitaciones propias de las otras técnicas de rutina.
INCORPORACIÓN DE FPA
La incorporación de este nuevo método al Programa Nacional de Control y Erradicación de la Brucelosis será un valioso aporte para lograr los objetivos propuestos por la institución oficial, ya que permitirá:
Detectar como positivos, animales que realmente padecen la enfermedad.
Evitará condenar falsos positivos al sacrificio.
Permitirá comercializar hembras con certificado antes de los 18 meses de edad.
Definirá correctamente reacciones positivas falsas debido a vacunaciones tardías o persistencia de títulos posvacunales inherentes a la sensibilidad aumentada de algunos animales a la Cepa 19.
Permitirá la certificación o recertificación de hatos o establecimientos libres, evitando inconvenientes creados por la aparición de sospechosos o falsos positivos.
VENTAJAS
La decisión de utilizar FPA en reemplazo del SAT y 2-ME como prueba de confirmación presenta otras ventajas:
Permite procesar muestras hemolizadas; rapidez del ensayo; simplicidad del ensayo; fácil interpretación del ensayo; validación internacional del mismo; no posee la toxicidad y el efecto cancerígeno del 2 mercapto etanol.
El costo del análisis es accesible. Muestreando un grupo de 100 animales, con un animal "ENFERMO" por SAT -2ME y "SANO" por FPA, el costo de no eliminar ese animal justifica gastos de laboratorio de dichos animales muestreados.
EJEMPLO
100 determinaciones de Rosa de Bengala C/U = G. 6.500 G. 650.000.
1 determinación de FPA C/U = G.19.500 G.19.500
100 extracciones de sangre C/U = G.1.000 G. 100.000
Total G. 769.500
Venta de hembra al mercado
Peso aproximado de 400 kg. a G. 6.000. KPV Total G. 2.400.000.
Esto es solo un ejemplo orientativo; no implica que el veterinario deba cobrar ese honorario de extracción de muestra, ni que G. 6.000 sea el precio exacto de venta, pero está dentro de los valores que maneja el mercado. Solo tenemos que considerar que por cada hembra sana (negativa) que descartamos como enferma nos alcanza para pagar:
Honorarios profesionales; análisis de laboratorio. Lo que realmente importa es que no estamos eliminando animales sanos; no perdemos beneficios económicos por establecimiento libre; desaparece la presión para obtener certificados sanitarios que no se corresponden con los resultados.
En esta enfermedad es de vital importancia el conocimiento epidemiológico de la misma por parte del veterinario asesor y del laboratorio que procesa las muestras.
El veterinario debe conocer los puntos críticos de la cadena epidemiológica para plantear una estrategia desde donde atacar para poder interrumpir el contagio de los animales en las fuentes de infección.
Es obligatorio e imperioso que los laboratorios de diagnóstico entiendan y conozcan la utilidad de cada ensayo (Rosa de Bengala, SAT, 2 ME, FPA, ELISA de competición, ELISA indirecto) a los efectos de indicar la prueba que corresponda de acuerdo a la situación epidemiológica planteada o la urgencia en la obtención de los resultados.
Consideramos que es importante avanzar en la implementación de ensayos de lectura en equipos, FPA, ELISA. Existen varios motivos, por ejemplo: Estandarización de las lecturas; utilización de controles positivos y negativos en forma continua; registro escrito de los ensayos; registro electrónico de los ensayos; reporte de datos epidemiológicos en forma rápida; disminución de la cantidad de puntos críticos; disminución de la cantidad de reactivos y soluciones.
CONCLUSIÓN
La utilización del método FPA como prueba confirmatoria para el diagnóstico de brucelosis es de gran importancia en un programa de control y erradicación de la enfermedad, como así también la posibilidad de usar como prueba de barrido, y de esa forma optimizar la detección de anticuerpos específicos para Brucella.
(*) Técnicos de CEDIVET.